甘油冷凍保藏菌種的原理及注意事項(xiàng)
發(fā)布時(shí)間：2019-03-15
菌種保藏是將微生物菌種采用適宜的方法妥善保藏，避免其死亡、污染，并保持其原有性狀基本穩(wěn)定的一種實(shí)驗(yàn)方法，也是微生物實(shí)驗(yàn)室極為重要的一項(xiàng)基礎(chǔ)性工作。
甘油冷凍保藏菌種是目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最為廣泛的一種的菌種保藏方法，原理是以甘油為保護(hù)劑，低溫冷凍條件下，使微生物的新陳代謝趨于停止，從而達(dá)到長期有效的保藏。一般來說，保藏溫度越低，保藏效果越好，目前實(shí)驗(yàn)室大都采用-80℃（-70℃）冰箱保藏。主要有以下注意事項(xiàng)：
1.選擇合適的培養(yǎng)基
勿使用選擇性培養(yǎng)基。一般使用非選擇性的增菌培養(yǎng)基，因?yàn)槲⑸镌谶x擇性培養(yǎng)基中生長某些生物特性可能丟失，保藏的菌種的生物特性可能與標(biāo)準(zhǔn)菌株特性不同。
2.菌液的濃度
菌液的濃度一般越大，菌種保存時(shí)間越長。保藏時(shí)細(xì)菌常使用菌液，霉菌常用無菌水或生理鹽水制備成的孢子懸液。
3.甘油濃度
甘油終濃度一般為10%~20%。由于甘油原液太粘稠，需要配制合適的甘油-水溶液，將菌懸液與甘油以1:1的體積比充分混勻后，分裝至提前滅菌好的保藏管中，-80℃（-70℃）冰箱保存。
4.反復(fù)使用
對菌種進(jìn)行保藏時(shí)注意“慢凍快化”，冷凍時(shí)降溫速率保持1℃/min,復(fù)蘇時(shí)用37℃水浴融化，能夠保證菌種最大的成活率。當(dāng)冷凍菌種融化后，應(yīng)避免再次冷凍，否則菌體的生存率會(huì)大幅度降低。
5.保存時(shí)間
該方法適合中長期菌種保藏，保藏時(shí)間一般為2-4年左右。
